Akademik Veri Yönetim Sistemi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Marmara Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Biyokimya Anabilim Dalı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2022
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: AYŞE ARZU GÜL
Danışman: Kadir Turan
Özet:
İnfluenza A Virüsü Yüzey Antijen Proteini
Hemaglutininin Mikroorganizma-larda Çözünür Halde Üretilmesi
Öğrenci Adı: Ayşe
Arzu GÜL
Danışman Adı :
Prof. Dr. Kadir TURAN
Amaç: İnsanlarda grip
salgınlarına neden olan influenza A virüsleri membranlı virüslerdir. Virüs
membranında taşınan hemaglutinin (HA) ve nöraminidaz (NA) proteinleri bu
virüslerin immün sistemde tanınmasında önemlidir. Bu nedenle inaktif saf virüs
partikülleri veya saflaştırılmış HA ve NA proteinleri aşı çalışmalarında
kullanılmaktadır. Çalışmamızda influenza A virüsü yüzey antijen proteinlerinden
HA’nın Escherichia coli ve Pichia
pastoris hücrelerinde rekombinant olarak çözünür halde üretilmesi amaçlandı.
Gereç ve Yöntem: İnfluenza A/WSN/33 (H1N1) tipi virüsüne ait HA tam
boyutta (HA0) veya HA1 domainini kodlayacak şekilde özgün oligonükleotid
primerler kullanılarak polimeraz zincir reaksiyonuyla (PZR) çoğaltılıp insan
IgG1 antikorlarının sabit bölgelerini kodlayan diziyle kaynaşmış halde bir ara
vektöre klonlandı. Kaynaşmış genler (HA0-Fc/HA1-Fc) ara vektör üzerinden PZR
ile çoğaltılıp E. coli ve P. pastoris'te ekspresyon yapan vektörlere
aktarıldı. Edinilen plazmit vektörler E.
coli ve P. pastoris'e transforme edilip hücrelerin üreme
profilleri belirlendi. Sonrasında hücrelerde sentezlenen rekombinant proteinler
SDS-PAGE/Gümüş boyama teknikleriyle incelendi.
Bulgular: E. coli
hücrelerinde protein ekspresyonu için, HA0-Fc kontrolünde T7 promotörü (pET-14b-HA0-Fc/pET-14b-HA1-Fc)
veya Lac promotörü (pLacI-HA0-Fc/pLacI-HA1-Fc) taşıyan plazmit vektörler oluşturulup
transformasyon sonrası üreme profilleri incelendi. HA1-Fc kodlayan plazmit
taşıyan bakterilerde bu protein yüksek seviyede üretilirken HA0-Fc füzyon
protein ekspresyonu belirlenemedi. Maya hücreleri için oluşturulan pPinkα-HA0.Fc/pPinkα-HA1.Fc
plazmitlerinin transformasyon sonrasında P. pastoris genomunda taşındığı PZR ile
belirlendi ancak rekombinant
proteinlerin ekspresyonu, SDS-PAGE/Gümüş boyama tekniğiyle saptanmadı.
Sonuç: Edinilen veriler, influenza
A virüsü membran proteini, HA proteininin bütün olarak E. coli hücrelerinde sentezinin konak için ileri düzeyde toksiktir.
Dolayısıyla, bu proteinin rekombinant olarak üretilmesini dizginleyen ekspresyon
sistemlerinin uygun olduğu anlaşıldı. Ayrıca
çalışmada P. pastoris hücrelerinde
HA proteini ekspresyonunda kullanılan sistem uygun değildir.
Anahtar Kelimeler: İnfluenza A, hemaglutinin, rekombinant
protein, aşı