Fare Mx2 proteinlerinin influenza virüsü RNA polimeraz enzimine etkilerinin araştırılması
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Marmara Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Biyokimya Anabilim Dalı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2013
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: İLKYAZ ERKAN
Danışman: Kadir Turan
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:İnfluenza virüsleri, Orthomyxoviridae ailesi içerisinde sınıflandırılan, negatif iplikli genoma sahip zarflı virüsleridir. Bu virüs ailesi içerisinde yer alan influenza A virüsleri insan sağlığı açısından önemli ve yaygın infeksiyonlara yol açan virüs tipidir. İnfluenza virüs infeksiyonlarına karşı en etkili savunma sistemi, doğal ya da edinsel bağışıklık sistemidir. Doğal savunma sistemi içerisinde değerlendirilebilecek hücre içi savunma sistemi virüslerin replikasyonunu zorlaştıran önemli bir bariyerdir. Bu mekanizmanın aktörlerinden biri, interferonların uyarısı sonucu sentez edilen Mx proteinleridir. Mx proteinleri Orthomyxovirus, Rhabdovirus, Paramyxovirus, Bunyavirus ve Alfavirus familyalarında yer alan birçok RNA virüsün replikasyonunu inhibe etmektedir. Bununla birlikte Mx proteinlerin moleküler düzeyde etki mekanizmaları hakkında bilgiler yetersizdir. Bu konuda elde edilen bulgular, influenza virüs infeksiyonları ile mücadelede büyük önem taşımaktadır. Bu tez çalışması kapsamında, farelere ait Mx2 proteininin influenza virüsü RNA polimeraz enzimine etkileri araştırıldı. Bu amaçla, standart DNA klonlama teknikleri ile fare Mx2 geni pCHA memeli ekspresyon vektörüne klonlandı ve pCHA-Mx2 vektörü oluşturuldu. Sitoplazmik lokalizasyon gösteren Mx2 proteinin lokalizasyon profilini değiştirmek amacıyla, SV40-T antijeni NLS dizisi taşıyan nMx2 proteini kodlayan bir diğer vektör, pCHA-nMx2 oluşturuldu. Bu vektörlerin Mx2 proteini kodladıkları hem Western melezleme hem de immünfloresans tekniklerle saptandı. NLS dizisi taşıyan nMx2 proteinin beklenenin aksine baskın olarak hücre sitoplazmasında lokalize olduğu gözlendi. Bu proteinlerin influenza virüsü RNA polimeraz enzimine etkilerini saptamak amacıyla, yapay influenza virüsü minireplikon modelinden yararlanıldı. Artan miktarlarda pCHA-Mx2 ve pCHA-nMx2 vektörleri minireplikon komponentleri ile birlikte fare orijinli Swiss3T3 ve insan orijinli HEK293 hücrelerine transfekte edildi. Transfeksiyondan 48 saat sonra, hücrelerde influenza virüsü RNA polimeraz enzimi aktivitesine bağlı olarak sentez edilen belirteç lüsiferaz aktivitesi ölçüldü. Elde edilen sonuçlar, Swiss 3T3 ve HEK293 hücrelerinde Mx2 proteininin influenza RNA polimeraz enzimi üzerine etkisinin sınırlı olduğunu gösterdi. Bu sonucun elde edilmesinde Mx2 proteininin hücre sitoplazmasında lokalize olmasının etkili olduğu düşünülmektedir.