Tuz Gölü'nden izole edilen aşırı halofilik bakterilerin izolasyon ve identifikasyon yöntemlerinin geliştirilmesi


Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Marmara Üniversitesi, Fen - Edebiyat Fakültesi, Biyoloji Bölümü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2000

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: NURAY KALLI

Danışman: MERAL BİRBİR

Özet:

TUZ GÖLÜ'NDEN İZOLE EDİLEN AŞIRI HALOFİLİK BAKTERİLERİN İZOLASYON VE İDENTİFİKASYON YÖNTEMLERİNİN GELİŞTİRİLMESİ Çalışmamızda İç Anadolu Bölgesinde Ankara, Konya ve Aksaray illeri sınırları içerisinde yer alan Tuz Gölü'nden alınan tuzlu su ve tuzların kimyasal analizi yapılmıştır. 18 aşırı halofilik bakteri suşu izole edilmiştir. Tüm suşların en iyi gelişmelerinin 39 0C'de pH 7.0'da %25 NaCl içeren kompleks geliştirme besiyerinde olduğu gözlenmiştir. Bu besiyerinde gelişen aşırı halofilik bakteri kolonilerin yuvarlak, konveks, kabarık, düz ve kubbeli, mat veya şeffaf, koloni boyutlarının 1-4 mm, krem, kırmızı ve portakal kırmızısı olduğu tespit edilmiştir %25 NaCl içeren sıvı besiyerinde kırmızı pigmentasyon görülmüştür. Optimal koşullar altında geliştiklerinde hücrelerin Gram negatif, hareketli, 3-5 mm uzunluğunda düzensiz çomaklar olduğu gözlenmiştir. Aşırı halofilik bakterilerin % 0.5, % 8 tuz içeren ve pH 9.0 ve 11.0 olan ortamlarda üremedikleri, tümünün aerop ortamda geliştikleri belirlenmiştir. Sıvı besiyerinde suşların pellikül, halka ve dipte çökelti oluşturdukları gözlenmiştir. Suşların tümü negatif nişasta hidrolizi, Voges-Prouskaeur ve DNaz aktivitesi, çoğunluğu negatif indol üretimi, pozitif jelatin, kazein, Tween 80 ve arjinin hidrolizi, lizin dekarboksilaz, oksidaz ve katalaz göstermiştir. 7 suş nitrati nitrite indirgeyerek nitrattan gaz oluşturmuştur. Bazıları D-glikoz, maltoz, laktoz, sukroz ve D-mannitol'ü tek karbon kaynağı olarak kullanmıştır. Çoğunluğunun glikozdan asit ürettiği belirlenmiştir. Aşırı halofilik bakteri suşlarının çoğu basitrasin (10U) ve rifampisin (5mg)'ye karşı duyarlı, novobiosin (5mg), ampisilin (10mg), eritromisin (15mg), kloramfenikol (30mg), penisilin G (10U), neomisin (30 mg), gentamisin (10mg), sefadroksil (30mg), trimetoprim/sulfametoksazol (1.25mg/23.75mg), tetrasiklin (30mg), siprofloksasin (5 mg) ve amikasin (30mg)'ye karşı dirençli bulunmuştur. Yapılan test sonuçlarına göre Şerefli Koçhisar Tuz Gölü'nden izole edilen aşırı halofilik bakterilerin Halobacteriaceae familyasına, Halobacterium cinsine ait Archaeobacteria olduğu düşünülmüştür. SUMMARY DEVELOPMENT METHODS OF ISOLATION AND IDENTIFICATION OF EXTREMELY HALOPHILIC BACTERIA ISOLATED FROM SALT LAKE Salt samples and salted water collected from Salt Lake located in Central Anatolia and particularly in the border of Ankara, Konya and Aksaray, Türkiye. Chemical analyses of the samples were made. Eighteen extremely halophilic strains were isolated. All strains grew well in 25 % (w/v) NaCl containing complex growth media at 39 0C, pH 7.0. The colony forms were circular, entire and undulate, convex, raised and pulvinate, opaque to more or less translucent. The colony sizes were 1 mm-4 mm, appeared in various shades of red, cream and red pigmentation was seen in the liquid media. The cells were aerobic, Gram negative, motile, 3.0-5.0 mm in length and pleomorphic rod-shaped. Strains did not grow in 0.5%, 8% (w/v) NaCl containing media at pH 9.0 and 11.0. Pellicle, ring formation, sediment and cloudy growth were seen in liquid media. All of the strains showed negative starch hydrolysis, Voges-Proskaeur reactions and DNase activities. Most of the isolates showed negative indol production and positive gelatin, casein, Tween 80 and arginine hydrolysis, lysine decarboxylase, oxidase and catalase activities. Seven of eighteen isolates reduced nitrate to nitrite and formed gas. Most of the isolates produced acid from glucose. Ten, seven, four and five of eighteen isolates produced acid from maltose, lactose, sucrose and mannitol, respectively. Most of these strains were susceptible to bacitracin (10U) and rifampicin (5mg) , resistance to novobiocin (5mg), ampicilin (10mg), erythromycin (15mg), chloramphenicol (30mg), penicilin G (10U), neomycin (30 mg), gentamicin (10mg), cefadroxil (30mg), trimethoprime/sulfamethoxazole (1.25mg/(23.75mg), tetracycline (30mg), ciprofloxacin (5 mg) and amikacin (30mg). These results were indicative for extremely halophilic Archaeobacteria. The isolated extremely halophilic bacteria may be the members of family Halobacteriaceae and genus Halobacterium.