Günümüzde kullanılan çeşitli amputasyon materyallerinin diş pulpası üzerindeki sitotoksik ve rejeneratif etkilerinin hücresel düzeyde incelenmesi

---

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Marmara Üniversitesi, Diş Hekimliği Fakültesi, Diş Hekimliği Klinik Bilimleri Bölümü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2013

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: GİZEM ÖZBAY

Danışman: BETÜL KARGÜL

Özet:

Günümüzde Kullanılan Çeşitli Amputasyon Materyallerinin Diş Pulpası Üzerindeki Sitotoksik Ve Rejeneratif Etkilerinin Hücresel Düzeyde İncelenmesi Bu araştırmanın amacı; Süt dişi pulpası mezenkimal kök hücreleri üzerinde yeni bir amputasyon materyali olan BiodentineTM ve Pro-ROOT MTA’nın osteo/odontojenik farklılaşma (rejenerasyon) kapasiteleri ile BiodentineTM, Pro-ROOT MTA, Formokreazol (FK), Ferrik Sülfat (FS) ve Kalsiyum Hidroksit (Ca(OH)2)’in sitotoksik etkilerinin karşılaştırılmasıdır. 50 adet kök rezorpsiyonu tamamlanmış süt dişi pulpasından mezenkimal kök hücreler (MKH) izole edilmiş ve hücre kültürleri hazırlanmıştır. 1., 3. ve 7. günlerde 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxy methoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS) testi ile MTA, BiodentineTM, FK, FS ve Ca(OH)2’in sitotoksisitesi incelenmiştir. Sonuçlar istatistiksel olarak değerlendirilmiştir. (INSTAT, Graph Inc. USA) MTA ve BiodentineTM materyallerinin rejeneratif etkisinin incelenmesi amacıyla 1., 7. ve 21. günlerde MTS, real-Time PCR (RT-PCR) ile Alkalen Fosfataz (ALP), Kollajen tip I ve Osteonektin tayini, konfokal görüntüleme ile Dentin Sialo Fosfo Protein (DSPP) ve Kollajen tip I analizi, Osteokalsin testi, Von Kossa ve ALP testi ve görüntülemesi yapılmıştır. MTS sonuçlarına göre 1., 3. ve 7. günlerde MTA en biyouyumlu materyal olarak bulunurken; BiodentineTM’nin FK, FS ve Ca(OH)2’e göre biyouyumluluğunun istatistiksel olarak anlamlı olmadığı tespit edilmiştir.(p>0.05) MTA ve BiodentineTM arasında ise istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmamıştır.(p>0.05) BiodentineTM 1., 7. ve 21. günlerde RT-PCR sonucunda ALP, Kollajen tip I ve Osteonektin aktivitesinde ve osteokalsin test sonucunda, DSPP ve Kollajen tip I görüntülemesinde MTA’ya göre daha üstün bulunmuştur. BiodentineTM osteo/odontojenik farklılaşma açısından MTA’ya göre daha üstün, MTA ise BiodentineTM’e göre daha az sitotoksik bulunmuştur. Elde edilen verilerle; BiodentineTM dental pulpa MKH’ler üzerindeki osteo/odontojenik farklılaşma kapasitesi nedeniyle, rejeneratif endodontide alternatif bir materyal olarak değerlendirilebilir. Anahtar Kelimeler: Amputasyon, Biodentine, Kök Hücreler, MTA, Rejeneratif endodonti SUMMARY The Evaluation of Cytotoxic and Regenerative Effects of Recently Used Pulpotomy Materials; at Cellular Level The aim of this study was to compare osteo/odontogenic differentiation (regeneration) capacities of a new amputation material named as BiodentineTM and the Pro-ROOT MTA and cytotoxic effects of BiodentineTM, Pro-ROOT MTA, Formokreazol(FK), Ferric Sulphate(FS) and Calcium Hydroxide(Ca(OH)2) on mesenchymal stem cells derived from dental pulp of 50 primary teeth with completed root resorption. Cell cultures were prepared. On the 1st, 3rd and 7th day, cytotoxicity of MTA, BiodentineTM, FK, FS, and Ca(OH)2 were analysed with 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS) assay and the results were statistically evaluated by INSTANT (Graph Pad Inc. USA). To compare the regenerative effect of MTA and BiodentineTM MTS assay, type I collagen, alkalinephosphatase(ALP) and osteonectin analysis with real-Time PCR(RT-PCR) and Confocal imaging of Dentin sialophosphoprotein(DSPP) and type I Collagen were taken, osteocalcin, Von Kossa and ALP tests were done on the 1st, 3rd and 21th day. According to MTS results on the 1st, 3rd and 7th days MTA was found the most biocompatible material; Biocompatibility of BiodentineTM, FK, FS and Ca(OH)2 showed statistically no significant difference.(p>0.05) and biocompatibility of MTA and BiodentineTM was found statistically not significant difference.(p>0.05) According to RT-PCR results on 1st, 7th and 21st days of ALP, osteonectin and collagen type I, imaging of collagen type I, DSPP and osteocalcin activity of BiodentineTM was superior to MTA. BiodentineTM was found better in osteo/odontogenic differentiation to MTA whereas MTA found less cytotoxic than BiodentineTM. Currently available evidence on osteo/odontogenic differentiation capacity of dental pulp MSCs, BiodentineTM can be considered as an alternative material for regenerative endodontics. Key Words: Pulpotomy, Biodentine, Stem cells MTA, Regenerative endodontics