İnsan beta aktin proteini ile influenza virüsü RNA polimeraz enzimi arasındaki ilişkinin araştırılması
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Marmara Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Biyokimya Anabilim Dalı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2019
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: NAZİFE GELMEZ
Danışman: Kadir Turan
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Amaç: Orthomyxoviridae ailesi içerisinde yer alan İnfluenza A virüsleri sık sık tekrarlayan salgınlarla insan sağlığını tehdit eden önemli viral patojenlerdir. Bu nedenle çok sayıda bilim insanı İnfluenza virüslerinin konak hücrelerle olan ilişkisini moleküler düzeyde aydınlatmak için yoğun çaba sarfetmektedir. Viral RNA'ların transkripsiyonu ve replikasyonu PB1, PB2 ve PA alt birimlerinden oluşan RNA polimeraz enzimi tarafından kataliz edilmektedir. Bu tez çalışmasında, daha önce maya ikili hibrit metodu ile ilişkileri saptanan viral RNA polimeraz enziminin PA alt ünitesi ile insan beta aktin (ACTB) proteini arasındaki ilişki memeli hücrelerinde araştırıldı. ACTB proteinin influenza virüsü replikasyonu açısından öneminin ortaya konması amaçlandı. Gereç ve Yöntem: Memeli hücrelerinde ekspresyon yapan pCHA plazmitine klonlanmış insan ACTB cDNA'sından belirli ekzon bölgeleri ters PZR ile uzaklaştırıldı ve delesyonlu ACTB proteini kodlayan vektörler oluşturuldu. HeLa ve/veya HEK293 hücreleri ACTB ve delesyonlu ACTB proteinleri ile İnfluenza A virüsü PA proteinlerini kodlayan plazmit vektörler ile birlikte transfekte edildi. Bu hücrelerde birlikte sentez edilen ACTB ve viral PA proteinleri arasındaki ilişki birlikte immün çöktürme ve hücre içi lokalizsayonları immünfloresan teknikleri ile analiz edildi. Bulgular ve Sonuç: Birlikte immün çöktürme ve immünfloresan teknikler transfekte HeLa ve/veya HEK293 hücrelerinde plazmitler üzerinden sentez edilen ACTB ve İnfluenza PA proteinlerinin etkileşim halinde olduğunu ortaya koydu. Delesyonlu ACTB ve viral PA proteinlerinin gösterdikleri etkileşim profilleri, ACTB proteininin özellikte amino-terminal bölgesinin viral PA proteini ile ilişkili olduğu; bu ilişkide PA proteinin karboksil-terminal yarımının (cPA) önem taşıdığını gösterdi. Bu verilerden İnfluenza virüsü kurulumunda vRNP'lerin sitoplazmada taşınması sürecinde ACTB proteinlerinin rolü olabileceği sonucuna varıldı. Anahtar Kelimeler: İnfluenza, Viral RNA polimeraz, PA protein, İnsan beta aktin proteini, vRNP