Yüksek hassasiyetle bir biyomolekülün ortogonal metotlarının tasarımı ve tayin sınırlarının sayısal analizi

---

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Marmara Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya Anabilim Dalı, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2025

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: ELİF ŞAHİN

Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): Ece Kök Yetimoğlu

Eş Danışman: Memet Vezir Kahraman

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Orijinal referans ürünü olarak da bilinen referans ürün, analitik metot geliştirme ve validasyon çalışması için çalışmada kullanılmıştır. Referans ürün spesifikasyonlarını inceledikten sonra spesifikasyonların SEC HPLC sonucunu içerdiğini ancak analitik bir test olarak Protein A kromatografisinin belirtilmediği anlaşılmıştır. Referans ürün spesifikasyonlarına ilişkin bir kayıt olmamasına rağmen, özellikle alt akım üretimi (USP) ve üst akım üretimi (DSP) ürünlerin rutin analizi için alternatif yöntemler gereklidir. Bu çalışmada, Uluslararası Uyumlaştırma Konferansı (ICH M10) tarafından belirlenen kılavuzlara uygun olarak, monoklonal antikorların (mAb) konsantrasyon tayini (titer) validasyonunda ortogonal iki kromatografik yönteminin etkinliği incelenmiştir. SEC HPLC analitik metot validasyon çalışması (0,01 mg/ml–2,0 mg/ml) % 1,0 (LLOQ seviyesi) ile % 200,0 aralığında gerçekleştirilmiştir. Protein A kromatografisi analitik yöntemi için (0,0078 mg/ml–4,0 mg/ml) % 0,78 (LLOQ seviyesi) ile % 400,0 doğrusallık seviyeleri arasında validasyon çalışması gerçekleştirilmiştir. Monoklonal antikor (mAb) için analitik metot validasyonu, Waters® HPLC ekipmanı, Empower® 3 isimli bir yazılıma sahip PDA dedektörü kullanılarak metotları geliştirilmiş ve valide edilmiştir. Elde edilen kromatogramlar/datalar proses edilerek istatistiksel analizler (ANOVA) ile doğrulanmıştır. Protein A kromatografisi ve SEC HPLC analitik metotları, ICH M10 kılavuzuna uygun olarak mAb referans ürünü için validasyon parametreleri oluşturularak gerçekleştirilmiştir.