Akademik Veri Yönetim Sistemi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Marmara Üniversitesi, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2019
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: Mehmet Mücahit Güncü
Danışman: MEHMET BURAK AKSU
Özet:ÖZET Kistik Fibroz Hastalarında Saptanan Polimikrobiyal Enfeksiyon Etkenleri Arasındaki Etkileşimlerin Araştırılması Mehmet Mücahit Güncü, M.Burak Aksu, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı AMAÇ: Kistik fibroz (KF) hastalarının klinik örneklerinden birlikte izole edilen Pseudomonas aeruginosa ve metisilin dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) suşları arasındaki karşılıklı etkileşimlerin incelenmesi amaçlanmıştır. Buna yönelik olarak in vitro koşullarda her bir patojenin üreme, biyofilm üretimi, antimikrobiyal duyarlılık paternleri üzerindeki karşılıklı etkileri belirlenmiştir. GEREÇ VE YÖNTEM: Çalışmaya KF hastalarının balgam örneklerinden birlikte izole edilmiş 9 MRSA ve 9 P. aeruginosa suşu dahil edildi. İzolatlar Luria-Bertani sıvı besiyerinde (LB ) üretildi; 8 ve 24 saatlik kültür süpernatantları (8s SN; 24s SN), mekanik bakteri lizatı ve ısı ile öldürülmüş bakteri hücreleri hazırlandı. Her bir izolat kendisiyle birlikte izole edilen suştan hazırlanan yukarıda belirtilen fraksiyonlarla birlikte inkübe edilerek üreme ve biyofilm üretimi (fenotipik yöntem ve taramalı elektron mikroskobu analizi kullanılarak) açısından test edildi. Ayrıca 24s SN varlığında antibiyotik duyarlılık (P.aeruginosa için tobramisin; MRSA için vankomisin ve linezolid) değişimleri araştırıldı. BULGULAR: P. aeruginosa fraksiyonlarının varlığında MRSA kökenlerinin üreme analizlerinde, 24s SN ile bir artış (%15.3) gözlenirken, ancak diğer fraksiyonlar azalmaya (%-12.1-%-30.3, aralığında) neden olmuştur. P. aeruginosa tüm fraksiyonları MRSA’nın biyofilm üretimini artırmıştır (%152.1-%293.1, aralığında). MRSA fraksiyonlarının varlığında P. aeruginosa kökenlerinin üreme analizinde, 24s SN ile artış (%9.3) görülürken, ancak diğer fraksiyonlar varlığında azalma (%-7.2-%-8.6, aralığında) gözlenmiştir. MRSA fraksiyonlarının çoğu ile P. aeruginosa’nın biyofilm üretimi artmış (%152.1-%293.1, aralığında), ancak hücre lizatı varlığında azalma (%-32.9) görülmüştür. Ayrıca SEM analizi ile de biyofilm artışı belirlenmiştir. MRSA’nın 24s SN ürünü, P. aeruginosa’nın tobramisin duyarlılığında herhangi bir etki göstermemiştir. P. aeruginosa’nın 24s SN ürünü, MRSA’nın linezolid MİK değerlerinde 2->32 kat artışa sebep olmuş, ancak vankomisin MİK değerlerinde değişiklik gözlenmemiştir. SONUÇLAR: Her iki bakteri için de durağan fazda salınan faktörlerin (24s SN) üremeyi artırdığı, diğer fraksiyonların ise inhibe ettiği görülmüştür. Genel olarak, hazırlanan tüm bakteri fraksiyonları her iki tür için de (MRSA için P.aeruginosa lizatı hariç) biyofilm üretimini desteklemektedir. 24s SN varlığında, MRSA kökenlerinin neredeyse tamamında (8/9 köken) linezolid duyarlılıklarında azalma (2->32 kat MİK artışı) ve dirençli kategoriye geçiş saptanmıştır. Bulgularımız, MRSA ve P. aeruginosa’nın polimikrobiyal enfeksiyonlarında patojenler arası etkileşimlere bağlı olarak üreme, biyofilm yapımı gibi fizyolojik süreçlerin yanısıra antibiyotik duyarlılıklarının da değişebileceğini göstermiştir. Gelecekte yapılacak çalışmalarla polimikrobiyal enfeksiyonlarında patojenler arası etkileşimde rol oynayan faktörlerin saptanması ve altta yatan moleküler mekanizmaların aydınlatılması ile bu enfeksiyonların patogenezi ve tedavisinde önemli ipuçları elde edilebilecektir. -------------------- SUMMARY Investigation of Interactions Between Pathogens Isolated From Polymicrobial Infections In Cystic Fibrosis Patients Mehmet Mücahit Güncü, M.Burak Aksu, Department of Medical Microbiology AIM: The aim of this study was to investigate the interactions between Pseudomonas aeruginosa and methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) strains co-isolated from clinical samples of cystic fibrosis (CF) patients. For this purpose, the mutual effects of each pathogen on in vitro growth, biofilm formation, and antimicrobial susceptibility patterns were determined. MATERIALS METHODS: Nine MRSA and 9 P. aeruginosa strains co-isolated from sputum samples of CF patients were included. All isolates were grown in Luria-Bertani broth medium, and 8 and 24 hour culture supernatants (8s SN; 24s SN), mechanically lysed and heat-killed bacterial samples were prepared. Each isolate were tested for growth and biofilm formation (by using phenotypic method and scanning electron microscopy analysis) with the presence of above fractions obtained from its co-isolate. Additionally, effects of 24s SN samples on antibiotic susceptibility (tobramycin for P.aeruginosa; vancomycin and linezolid for MRSA) were investigated. RESULTS: Analysis of MRSA growth in the presence of P. aeruginosa fractions revealed an increase (mean 15.3%) with 24 SN, but decrease with other fractions (means -12.1% to -30.3%). MRSA biofilm formation in the presence of P. aeruginosa all fractions was significantly increased (means 152.1% to 293.1%). P. aeruginosa growth in the presence of MRSA fractions showed an increase (mean 9.3%) with 24 SN, but decrease with other fractions (means -7.2% to -8.6%). Biofilm formation of P. aeruginosa showed increases with fractions prepared from MRSA (means 152.1% to 293.1%) but decreased with cell lysates (mean, -32.9%). These biofilm increases were also observed in the SEM studies. 24s SN from MRSA had no effect on tobramycin susceptibility of P. aeruginosa strains. 24s SN from P. aeruginosa caused 2->32 fold increase in linezolid MICs of MRSA strains, but no changes observed on vancomycin MICs. CONCLUSION: The factors released at the stationary phase (24s SN) were increased the growth of both bacteria, and other fractions caused growth inhibition. In general, all bacterial fractions (except P.aeruginosa cell-lysate) were supported biofilm formation of both species. 24s SN caused decrease in linezolid susceptibility (2->32 fold MIC increase) and change to resistant category in almost all MRSA isolates (8/9). Our results are shown that interspecies interactions can affect the physiological processes such as growth, and biofilm formation as well as antibiotic susceptibility profiles in polymicrobial infections involving MRSA and P. aeruginosa. Future studies conducting to detect the factors related with the interactions of pathogens and highlight the backround molecular mechanisms would give important insights and clues for treatment of polymicrobial infections.