Ayvalık Tuzlası'ndan izole edilen halofilik bakterilerin karakterizasyonu
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Marmara Üniversitesi, Fen - Edebiyat Fakültesi, Biyoloji Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2002
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: RAHEL ELEVİ
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): Pervaneh Assa
Eş Danışman: Meral Birbir
Özet:ÖZET Ayvalık Tuzlası Türkiye'de tuz üretiminin gerçekleştiği önemli deniz tuzlalarından biridir. Çalışmamızda bu bölgeden alman tuzlu su ve tuzların kimyasal analizleri sonucunda tuzlu sudaki toplam sertlik 5.25 F., Na 49 g/l, Cl" 5600 g/l, Ca++ 18 g/l, Mg^ 1.82 g/l, HC03" 167.14 g/l, S04"2 12.3 g/l ve pH 8.87 olarak; tuz örneğinde ise toplam sertlik 3085 F., Na+ 343 g/l, CY 973000 g/l, Ca+2 2120 g/l, Mg+2 6208.65 g/l, HCO3" 240.34 g/l, S04"2 4.98 g/l ve pH 8.49 olarak belirlenmiştir. Tuz örneğindeki uçucu madde (nem) miktarı ise % 0.83 olarak tespit edilmiştir. Ayvalık Tuzlası'ndan izole edilen aşırı halofilik bakterilerin tümünün Gram negatif, hareketli, 2.5-5.0 um boyutunda düzensiz çomak, üçgen, kare halinde hücreler olduğu saptanmıştır. Ayrıca bu bakteriler pastel pembe, koyu kiremit kırmızısı, kan kırmızısı, pembe, yavru ağzı, kırmızı ve krem renkli; yuvarlak, düz kenarlı koloniler oluşturmuşlardır, olduğu saptanmıştır. Tuzlardan ayrımı yapılan bakteri suşlarının C50 karotenoidlerinden dolayı renkli pigmentler içerdikleri düşünülmektedir. Biyokimyasal ve enzimatik test sonuçlarına göre aşın halofilik bakterilerin tamamı pozitif oksidaz ve katalaz aktivitesi göstermiştir. Arjinin varlığında anaerobik büyüme ve triptofandan indol üretimine ise negatif reaksiyon gösterdikleri gözlenmiştir. Ayrıca aşırı halofilik bakterilerin tümünde kazein, Tween 20 ve Tween 80 hidrolizlerinin negatif olduğu belirlenmiştir. Nitrat varlığında aerobik ve anaerobik koşullar altında gelişmişlerdir. Suşların % 86'sı aerobik, %71.4'ü ise anaerobik koşullarda nitratı nitrite indirgeyebilmişlerdir. Ayrıca nitratı nitrite indirgeyen bakterilerin tümünün anaerobik ortamda gaz oluşturabildiği saptanmıştır. Aşırı halofilik bakterilerin % 86'sı nişastayı, % 57'si ise jelatini hidroliz edebilmiştir. Bu suşların farklı antibiyotiklere karşı olan duyarlılıkları disk difüzyon metodu ile belirlenmiştir. Bu suşların basitrasin (10U), novobiosin (5 ug) ve eritromisin'e (15 ug) karşı duyarlı; ampisilin (10 ug), kloramfenikol (30 ug), penisilin G (10U), gentamisin (10 ug), sefadroksil (30 ug), trimethoprim/sulfamethozol (1.25 ug/23.75 ug), tetrasiklin (30 ug), siprofloaksasin (5 ug), amikasin (30 ug), spiramisin (100 ug) ve streptomisin' e (10 ug) karşı ise dirençli olduğu saptanmıştır. vmLowry Metodu protein konsantrasyonunun tespitinde uygulanmıştır. Aşırı halofılik bakterilerden izole edilen protein, kuyu başına 25 ug gelecek şekilde tatbik edilip sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezinde uygulanmıştır. Elektroforez işlemi sonunda 2 ve 7 numaralı suşlar ile; 3, 5 ve 8 numaralı suşların protein profillerinin birbirlerinin aynısı olduğu ve aynı cins altında bulunabileceği gözlenmiştir. Diğer 1, 4, 6, 7, 9 ve 10 ile belirlenen suşların ise protein paternlerinin farklı oldukları saptanmıştır. Ayvalık Tuzlası'ndan izole edilmiş olan suşlardan 1, 2, 3 ve 4 numaralı olanlar fosfatidil gliserol (PG), fosfatidil gliserofosfatın metil esteri (PGP-Me), fosfatidil gliserosülfat (PGS) fosfolipidleri ve triglikosil dieter (TGD-2) glikolipidlerine; 5, 6 ve 7 ile numaralandırılan polar lipidler ise fosfatidil gliserol (PG), fosfatidil gliserofosfatın metil esteri (PGP-Me), fosfatidil gliserosülfat (PGS) fosfolipidleri ve sülfatlanmış diglikosil dieter (s-DGD-1) glikolipidinin C20C20 türevlerine sahiptir, înce tabaka kromatografisi sonucu elde etmiş olduğumuz bu polar lipid sonuçlarına göre Ayvalık Tuzlası'ndan ayrımı yapılan 1, 2, 3 ve 4 numaralı suşlarımızın Holoarcula cinsine; 5, 6 ve 7 ile numaralandırılmış suşların ise Halorubrum cinsine ait türler olabileceği tespit edilmiştir. Plazmid izolasyonu çalışmamızda agaroz jel elektroforezinde 1 1 farklı kilobaz çifti bulunan standart plazmid markerlerine dayanılarak, Ayvalık Tuzlası'ndan izole edilen örneklerin de plazmid boyutları saptanmıştır. 4 ve 6 numaralı suşlarda 157.5 kilobaz çifti ve 7 numaralı susta 153 kilobaz çiftine sahip birer plazmid bandı gözlenmiştir. 5 numaralı susta ise 138 ve 103 kilobaz çiftine sahip iki plazmid bandı bulunmaktadır. Elde ettiğimiz test sonuçlarına göre Ayvalık Tuzlası'ndan izole edilen aşırı halofilik bakterilerin Halobacteriaceae familyasına; Haloarcula ve Halorubrum cinsine ait Arkeabakteri olabilecekleri anlaşılmıştır. 07.2002 Rahel ELEVI ıx