Meme kanseri Hücre Kültüründe Igfbp 5 in hücre içi lokalizasyonun önemi ve siRNA uygulamaları ile Igfbp 5 in fonksiyonel rolünün araştırılması

---

Akkiprik M. (Yürütücü), Özer S. A., Erzik C.

TÜBİTAK Projesi, 2007 - 2009

• Proje Türü: TÜBİTAK Projesi
• Başlama Tarihi: Temmuz 2007
• Bitiş Tarihi: Temmuz 2009

Proje Özeti

Igfbp-5 meme kanserinde hücre çogalması, farklılasma ve migrasyonda önemli bir rolü olan, multifonksiyonel

bir proteindir. Bu çalısmanın amacı MDA-MB-435 meme kanseri hücre serisinde

IGFBP5’in hücre içi lokalizasyonunun fonksiyonel önemini ve T47D hücre serisinde bu genin

sessizlestirilmesinin etkilerini arastırmaktır. Bu etkileri analiz etmek için , IGFBP5’in nükleer

lokalizasyon (NLS) dizisini site directed mutagenez yöntemi ile delesyona ugrattık. FuGene HD

transfeksiyon ajanı ile olusturulan ekspresyon vektörleri MDA-MB-435 meme kanseri hücre serilerine

aktarıldı. Ayrıca, T47D hücrelerinde IGFBP5 siRNA ile sessizlestirilerek fonksiyonel etkileri ve

seramidin tetikledigi apoptoza direnç kapasitesi degerlendirildi. Fonksiyonel analizler gösterdi ki dogaltip

IGFBP5 eksprese eden hücreler vektör transfekte hücrelere kıyasla anlamlı olarak daha düsük

hücre büyümesi ve mortalite sergilerken, NLS mutant IGFBP5 eksprese eden hücreler anlamlı olarak

daha yüksek çogalma ve migrasyon gösterdiler. Floresan mikroskop görüntüleri gösterdi ki dogal-tip

IGFBP5 çekirdekte lokalize olurken NLS mutant IGFBP5 sitoplazmada birikmektedir. siRNA

çalısmaları IGFBP5’in kapatılmasının T47D meme kanseri hücrelerinin tümör karakteristiginde kritik bir

rolü olmadıgını ve C2-tetikledigi apoptoz potansiyelini etkilemedigini gösterilmistir. Sonuç olarak, bu

bulgular IGFBP5’in NLS delesyonunun MDA-MB-435 hücrelerinde bu proteininin sitoplazmada

birikmesine ve hücre çogalması ve migrasyon yeteneklerinde artısa neden oldugunu göstermektedir.

Diger yandan, IGFBP5’in sessizlestirilmesinin T47D hücrelerinin kaderini etkilemedigi tespit edilmistir.